Conoscenza delle tecniche della ricerca biomedica preclinica, della biologia strutturale e cellulare molecolare, con particolare riferimento alle metodiche utilizzate per lo studio dei principali processi cellulari e della loro regolazione, alle tecniche di investigazione biofisica delle proteine, alle tecniche di studio del metabolismo cellulare e agli approcci sperimentali per l'analisi dei metabomica
Conoscenze: tecniche di investigazione biofisica delle proteine, quali spettroscopie di fluorescenza, dicroismo circolare, infrarosso, risonanza magnetica nucleare, light scattering dinamico; tecniche di coltura cellulare e di manipolazione dell'espressione genica, tecniche citofluorimetriche applicate allo studio di molecole segnalatorie, tecniche di microscopia confocale per l’analisi real-time di mediatori molecolari e metodi di indagine del metabolismo cellulare.
Competenze: il corso mira a far acquisire allo studente le capacità di analisi necessarie alla gestione di esperimenti di tipo biofisico e biologico e alla loro integrazione al fine di ottenere risultati obiettivi e razionali.
Prerequisiti
Conoscenza dal punto di vista teorico dei fenomeni cellulari che verranno trattati da un punto di vista dei metodi di indagine. Conoscenza dei vari livelli strutturali di proteine (struttura primaria, secondaria, terziaria, quaternaria). Conoscenza delle basi dei processi di folding ed aggregazione proteica.
Metodi Didattici
Il corso prevede lezioni frontali, in cui si individuano i punti chiave del corso e si approfondiscono le tematiche specifiche, ed esercitazioni, in cui vengono osservate, applicate ed elaborate alcune delle procedure descritte.
Altre Informazioni
Gli studenti possono accedere al materiale didattico messo a disposizione dal docente attraverso sito web dedicato.
Il corso prevede sessioni di esercitazione strumentale.
Modalità di verifica apprendimento
Esame orale finalizzato alla valutazione della preparazione e della capacità critica dello studente per le tematiche affrontate. Si porranno problemi pratici a risposta aperta e si valuterà la capacità dello studente di delineare strategie di indagine pertinenti con le tematiche del corso. L'esame si svolgerà in un'unica sessione per permettere allo studente di elaborare risposte che coprano tematiche multiple.
Programma del corso
Biochimica strutturale: utilizzo della spettroscopia di fluorescenza (F), di dicroismo circolare (CD), risonanza magnetica nucleare (NMR), light scattering dinamico (DLS).
Utilizzo di un fluorimetro, spettropolarimetro CD, magnete di NMR, strumento di DLS.
Svolgimento di esperienze partiche utilizzando proteine in vari stati conformazionali.
Biochimica cellulare: Introduzione alle colture cellulari: metodologie adottate per la coltivazione di cellule eucariote in vitro. Metodi di allestimento di colture cellulari primarie e secondarie e tecniche di immortalizzazione e trasformazione cellulare. Controllo dell’espressione genica: overespressione di proteine eterologhe e silenzia mento genico. Tecniche di studio della proliferazione cellulare. L’apoptosi: metodi di studio dei principali markers apoptotici. La segnalazione cellulare: metodiche di indagine dei principali effettori e secondi messaggeri cellulari. Analisi real-time di mediatori molecolari mediante tecniche citofluorimetriche e di microscopia confocale. Tecniche di indagine dei fenomeni associati con la progressione tumorale: invasività, crescita ancoraggio indipendente, migrazione transendoteliale, utilizzo di modelli xenograft. Metodi di studio del metabolismo cellulare e analisi dei metaboliti sia intra- che extra-cellulari, mediante tecniche ad end-point e analisi in tempo reale.